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Hoechst 33342是一种A:T特异性的DNA小沟配基，具有细胞膜渗透性，广泛用于细胞核DNA检测的荧光染料。与DNA结合后产生非常强烈的蓝色荧光，最大激发波长在350nm左右，最大发射波长在461nm左右。与其它Hoechst染料不同，Hoechst 33342由于多一个乙基，具有更强的亲脂性。研究发现可替代几种著名的DNA嵌入剂。

Hoechst 33342可通过流式细胞分选（FACS）进行基于DNA内容物的活细胞分选，可用来监测活细胞的染色质分布，用来检测BrdU插入细胞情况，通过荧光显微镜进行固定细胞观察，和研究凋亡早期和细胞周期分布情况。除了在荧光方面的功能，Hoechst 33342在细胞类型区分方面呈现多样化效应。可用来诱导细胞分化，可逆结合弗兰德红白血病细胞，抑制Topo I（拓扑异构酶I）活性，诱导HL-60细胞的凋亡，以及调控连接肌质网细胞的Ca2+外流并影响细胞分化。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可达20mg/ml。用于细胞核染色，推荐工作浓度为0.5～10μg/ml。

• 储存液配制：
  用双蒸水溶解，溶解度高达20mg/ml，根据实际情况配制所需浓度的储存液如5mg/ml。储存液2～8℃避光保存，至少1个月有效。
  注意：本品用磷酸盐缓冲液溶解会出现沉淀。
  
• 工作液配制
  用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5～10μg/ml）。
  
• 固定的细胞或组织染色
  对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。Hoechst 33342染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33342染色。
  
  • 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3～5min。
    
  • 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2～3次，每次3～5min。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=350/461nm。
• 活的细胞或组织染色
  
  • 细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。对于六孔板，一个孔通常需加入1mL染色液；对于96孔板，一个孔通常需加入100μL染色液。
    
  • 在37℃培养细胞10～20min。
    
  • 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
    
  • 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=350/461nm。

• Hoechst 33342对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
  
• 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
  
• 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（Fluoromount-GTM抗荧光淬灭封片剂（水溶性），货号：KM0182～5ML）。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。